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网状纤维染色的方法及应用

网状纤维染色的方法及应用

                                                                                                                               ——李国平

包括:胶原纤维、网状纤维、弹性纤维

1、直径0.2-1um,分支多,交织成网,由III型胶原构成,常伴有其它类型的胶原、蛋白多糖和糖蛋白,PAS染色呈紫红色网状纤维具有64nm的周期性横纹,HE染色不着色,具有嗜银性,经银染法染成黑色,故又称嗜银纤维。

2、网状纤维存在于各种组织中,常见于上皮的基膜,还有平滑肌、脂肪细胞、毛细血管和神经纤维都有网状纤维包裹,多分布于造血器官和淋巴网状器官,如红骨髓、脾、淋巴结、

肝、扁桃体和胸腺,消化管和呼吸道管壁的淋巴组织内,并成为这些器官的网状支架。


组织

vG

Masson三色法

MSB

PTAH

PAS

网状纤维

六胺银

自体荧光检测

HE

胶原蛋白

红色

蓝绿色

蓝色

橘红

+

深粉

网状蛋白

黄色

蓝绿色

蓝色

棕黄

++

弹力蛋白

黄色

蓝色

棕黄

+

肌肉

黄色

红色

红色

蓝色

+

深粉

基底膜

黄色

蓝绿色

蓝色

橘红

+++

红色

蓝绿色

蓝色

橘红

+

深粉

软骨

变化

变化

变化

变化

++

变化

变化

纤维素

黄色

红色

红色

蓝色

+/

1、网状纤维的染色可分为染料染色和金属浸染。 

2、网状纤维的染色方法主要使用银盐

1氨水直接反应型:James法,Lillie法,Lillie-Fullmer

2、氢氧化钠/钾反应型:Gomori法,Gordon-Sweet 法,Wilder法,Perdran,Bielschowsky。 

3、碳酸锂/钠反应型:Foot法 ,Hortega,Hamason-Lushbangh法,DelRio-Hortega

类别

James

Foot

Gomori

硝酸银水溶液

5% 20ml

10% 10ml

10% 8ml

氨水滴定

+

碳酸锂饱和水溶液

10ml

氢氧化钾水溶液

10% 2ml

沉淀洗涤

+

+

氨水滴定

+

+

后加硝酸银水溶液

+

后加氨水

+

去离子水稀释至

40ml

100ml

100ml

溶液性状

稍浊

清亮

稍浊

1脱蜡至水化

2、0.5%高锰酸钾8-10分钟

32%草酸漂白即可,水洗

42%铁明矾媒染10分钟,细水速洗

5Gomori氏银氨液1分钟,晃动,细水速洗

610%福尔马林还原1分钟,水洗

70.2%氯化金调色,水洗

82%5%硫代硫酸钠30秒,水洗

9、核固红复染,水洗,脱水,透明,封固

包括:充分氧化、深度漂白、适度媒染、精准镀银、精细还原、精准分化

1、充分氧化

①作用:使网状纤维具有选择性,增强染色能力,改善背景色调,减弱对胞核的着染,并有利复染。

②氧化的试剂: 0.5%高锰酸钾

高锰酸钾 0.5g

蒸馏水加至 100ml

③影响氧化的因素:浓度、时间、试剂有效性

2、深度漂白

①漂白的作用:漂白后使组织无颜色,避免干扰

②漂白的原理:

2MnO4- + 5C2O42- +16H +==2Mn2+ + 10CO2 +8H2O

③试剂:2%草酸

3、适度媒染

①媒染的作用:是加强网状纤维对银氨液的选择性

②媒染的原理:水溶液内能够电离出三价铁离子,正电荷,可以和纤维表面的蛋白结合,在纤维和金属银作用过程中,起到媒介作用

③媒染试剂:2%的硫酸铁铵(俗称铁明矾)

④影响因素:温度,时间,冲洗的技巧

4、精准镀银

镀银的作用:网状纤维是由含有糖蛋白的胶原蛋白组成,易与氨性银结合,即带正电荷的二氨合银离子被具有嗜银性物质的网状纤维吸附,银氨液中的银络合物在媒染剂的作用下与组织中蛋白结合

②镀银的原理:AgNO3+KOHAgOH+KNO3

2AgOH Ag2O+H2O

Ag2O+4NH4OH2[Ag(NH3)2]OH+3H2O

③镀银的试剂:托伦试剂

④试剂的配制:染色的关键,关系成败

Gomori银氨液的配制:

10AgNO34+10KOH1份→灰黑色沉淀(记住总量)→加水洗涤反复3(凑足总量)→滴加浓氨水→沉淀刚好溶解→加10%硝酸银→沉淀再次生成→滴入0.5-1滴的浓氨水,观察沉淀物将溶尽,尚留数个小颗粒时停止→加蒸馏水10倍稀释(托伦试剂)

5、精细还原

①还原的作用:把与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成棕色的金属银

②还原的原理:

2[Ag(NH3)2]OH+HCHO 2Ag+HCOOH+4NH3+H2O

③还原的试剂 :4%甲醛 (10%福尔马林)

④影响因素:中性、酸性、操作技巧

6、精准分化和定影

①分化的作用及定影:组织经银氨液染色及甲醛还原后,使多余的银与氯化金反应产生氯化银,然后再用硫代硫酸钠洗去组织上未还原的银盐,从而使组织内各成分显示清晰,已与网状纤维结合的银盐固定得更加牢固。

②分化使用试剂: 0.2%氯化金

③定影使用试剂:2%硫代硫酸钠

1、复染的作用:使对比明显,减少非特异染色

2、复染的争论:要不要复染,选择什么方法复染

3、使用的试剂:核固红

4、试剂配制:0.1%核固红:取洁净烧瓶加蒸馏水100ml、硫酸铝5g加热完全溶解后,加核固红0.1g混合溶解,(加入少许麝香草酚)降室温,过滤,备用

组织、脏器网状支架的保留、塌陷或完全破坏,网状纤维的多少、粗细、疏密和有无断裂,对于判断病变的性质、程度及其发展与转归具有重要意义。



注:建议配合视频学习,效果更

回放更新时间:88日,回放视频观看方式【关注达科为医疗公众号,点击达学堂菜单课后回放进入学习】

病理·达学堂

2020.07.23




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